Western無(wú)蛋白快速封閉液
Protein Free Rapid
Blocking Buffer for WB
● 產(chǎn)品組成：
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貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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保存條件
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PF1070-100ml
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Western無(wú)蛋白快速封閉液
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100 ml
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2-8℃
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PF1070-500ml
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Western無(wú)蛋白快速封閉液
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500 ml
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2-8℃
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說(shuō)明書
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一份
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本產(chǎn)品專為快速高效封閉Western Blot 轉(zhuǎn)印膜而設(shè)計(jì)，采用無(wú)蛋白配方，避免抗體與封閉劑的非特異結(jié)合，最大程度地降低了背景。同時(shí)，本封閉劑無(wú)內(nèi)源的磷酸化蛋白及生物素，對(duì)磷酸化特異抗體及生物素檢測(cè)也不會(huì)產(chǎn)生干擾。本封閉劑不與蛋白產(chǎn)生非特異性結(jié)合，因而只封閉膜而不會(huì)屏蔽樣品蛋白的抗體識(shí)別位點(diǎn)，大大提高了抗體檢測(cè)靈敏度。實(shí)驗(yàn)表明，本封閉劑對(duì)許多抗體都有不同程度的信號(hào)增強(qiáng)作用。然而這種信號(hào)增強(qiáng)作用因抗體而異，對(duì)某一特定抗體，并不一定具有確定的信號(hào)增強(qiáng)作用。
注意： 沒(méi)有任何一種封閉劑能適合所有抗原和抗體的檢測(cè)系統(tǒng)。如出現(xiàn)本試劑不適合的抗體，請(qǐng)?zhí)鎿Q使用其它種類的封閉劑如BSA或脫脂奶粉等。
● 貯存：
2-8℃貯存，有效期一年。
● 注意事項(xiàng)：
1. 快速高效：10-60 min內(nèi)完成封閉；只結(jié)合封閉轉(zhuǎn)印膜而不結(jié)合蛋白，因此不會(huì)屏蔽樣品蛋白的抗體識(shí)別位點(diǎn)，與傳統(tǒng)的脫脂奶粉和BSA 封閉相比信噪比更高；
2. 方便快捷：無(wú)需稀釋，即取即用；
3. 性能可靠：無(wú)蛋白配方，與抗體無(wú)交叉反應(yīng)；
4. 應(yīng)用范圍廣：無(wú)磷酸化蛋白，無(wú)生物素，尤其適合磷酸化特異抗體及生物素檢測(cè)系統(tǒng)；
5. 節(jié)省抗體：使用本封閉劑后，所需的最適抗體濃度低于常規(guī)使用濃度，可大大節(jié)省抗體使用量。
6. 與PVDF膜相比，NC膜需要更長(zhǎng)時(shí)間的封閉。
● 使用說(shuō)明：
1. 本產(chǎn)品無(wú)需稀釋，開蓋即用。
2. 完成轉(zhuǎn)膜后，使用TBST漂洗轉(zhuǎn)印膜3次，每次5分鐘；
3. 將轉(zhuǎn)印膜放入到雜交孵育盒中，加入10-20 ml 無(wú)蛋白快速封閉液完全覆蓋轉(zhuǎn)印膜，置于搖床輕輕搖動(dòng)，參考下表確定封閉時(shí)間：
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膜類型
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推薦封閉時(shí)間
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反應(yīng)溫度
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PVDF膜
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10-20分鐘
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常溫 25度
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NC膜
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40-60 分鐘
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常溫25度
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注意：使用本產(chǎn)品，PVDF膜和NC膜使用推薦封閉時(shí)間，經(jīng)多種抗體的測(cè)試封閉效果顯著優(yōu)于常規(guī)的BSA封閉1 h。對(duì)于一些背景非常高的抗體，可以嘗試延長(zhǎng)封閉時(shí)間。如有特殊需要，也可4℃封閉過(guò)夜。
4. 封閉結(jié)束后棄去封閉液，進(jìn)行Western Blot后續(xù)操作。
● 實(shí)驗(yàn)示例：
Jurkat細(xì)胞總蛋白GAPDH檢測(cè)
電泳條件：200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min
轉(zhuǎn)膜條件：NC膜，1×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液(Cat:RT5020)
恒流400 mA 35 min 65-59 V
封閉：無(wú)蛋白封閉液（Cat：PF1070） RT 60 min
一抗：兔GAPDH多抗(Cat: RGA1040) 1:2000 過(guò)夜4℃孵育
二抗：羊抗兔IgG-HRP(Cat: RGA1040) 1:5000 RT 60min
ECL發(fā)光：RealECL發(fā)光液（Cat:EC2520 ） 10秒曝光
植物葉綠體LHCa3檢測(cè)
Electrophoresis: 10% RealPAGE SDS
Electrophorosis(RTD6148)
Transfer: 1×RealBlot transfer buffer(Cat:RT5020)
350 mA blotting to NC membrane for 30
min.
Blocking: 無(wú)蛋白封閉液（Cat:PF1070） RT for 20 min;
BSA at RT for 1 h.
Primary antibody: Lhca3（Cat:RGL2080） 1:2000 dilution at RT for
1h
Secondary antibody: 1:5000 dilution using
Goat Anti-Rabbit IgG AP(Cat:AGR1030)
Detection: using
BCIP/NBT(Cat:BN1026) at RT for 5 min