氨芐青霉素溶液(100 mg/ml)
● 產(chǎn)品包裝：
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產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品包裝
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說(shuō)明書(shū)
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AA0120S-02
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氨芐青霉素溶液(100mg/ml)
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10×1 ml
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1份
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
氨芐青霉素(Ampicillin, Amp)又稱安比西林、氨芐西林，是一種β-內(nèi)酰胺類抗生素,干擾肽聚糖的交聯(lián)從而抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。氨芐青霉素時(shí)常被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中，如用于配制含氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基或LB平板等。氨芐青霉素溶液已經(jīng)0.22
μm過(guò)濾除菌，可以直接添加到培養(yǎng)基中。一般推薦工作濃度為50～100
μg/ml。
本氨芐青霉素溶液已經(jīng)優(yōu)化溶解液，可以保持溶液在-20℃下基本不結(jié)冰，方便使用的同時(shí)降低了反復(fù)凍融對(duì)抗性的影響。
● 貯存、效期及運(yùn)輸：
-20℃保存；有效期6個(gè)月；濕冰運(yùn)輸。
● 使用方法：
1. 取出-20℃保存的氨芐青霉素溶液，常溫徹底溶化，完全混勻。
注：溶液在-20℃下基本為流動(dòng)性溶液，如有冰晶形成，常溫徹底溶化后使用。
2.一般Amp在LB中終濃度為50～100
μg/ml?？梢源篌w按照1/1000 LB體積加入100 mg/ml Amp溶液，如100 ml LB中加入50-100 μl Amp 100 mg/ml。
注：氨芐青霉素對(duì)高溫敏感，要等待LB瓊脂溫度低于55℃后再加入氨芐溶液。
3. 在所有的細(xì)菌篩選抗生素中，氨芐青霉素的穩(wěn)定性最為不佳，參照下表確定使用的效期：
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類型
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貯存溫度
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抗性維持時(shí)間
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備注
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LB氨芐平板
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4-8℃
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＜2周
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平板要Parafilm封口，避免平板水分蒸發(fā)干裂
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氨芐溶液（100mg/ml）
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-20℃
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6個(gè)月
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盡量降低溶液反復(fù)凍融次數(shù)
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氨芐溶液（100mg/ml）
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4-8℃
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＜2周
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盡量避免溶液貯存在4-8℃
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LB液體搖菌
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37℃培養(yǎng)
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＜2天
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搖菌時(shí)，OD值控制在3以內(nèi)
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● 注意事項(xiàng)：
1. 衛(wèi)星菌落：LB氨芐瓊脂平板培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，會(huì)發(fā)現(xiàn)一個(gè)大菌落的周圍會(huì)出現(xiàn)一些小的菌落，這些小的菌落稱為衛(wèi)星菌落（satellite
colony）。原因：氨芐青霉素可以被β-內(nèi)酰胺酶（β-lactamase）水解。平板上的細(xì)菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶分泌到細(xì)胞外，隨著細(xì)菌的生長(zhǎng)，培養(yǎng)基中的β-內(nèi)酰胺酶會(huì)不斷增加，這時(shí)培養(yǎng)基內(nèi)氨芐青霉素會(huì)被降解，因此沒(méi)有氨芐抗性質(zhì)粒的小菌群則環(huán)繞大菌落生長(zhǎng)，產(chǎn)生衛(wèi)星菌落。衛(wèi)星菌落沒(méi)有氨芐抗性，挑取單菌落時(shí)，不要挑取衛(wèi)星菌落培養(yǎng)。
2. 質(zhì)粒丟失：氨芐抗性細(xì)菌在傳代的時(shí)候，會(huì)出現(xiàn)質(zhì)粒丟失，傳代次數(shù)越多，質(zhì)粒丟失的可能性越大。對(duì)于其他抗生素如氯霉素，細(xì)菌如果丟失了部分帶抗性的質(zhì)粒，該菌在含有氯霉素的培養(yǎng)基中是不會(huì)生長(zhǎng)的。但是對(duì)于氨芐則不然，在液體培養(yǎng)液中，培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的培養(yǎng)基中氨芐的濃度會(huì)降低，丟失了一部分質(zhì)粒的細(xì)菌也可以在其中生長(zhǎng)。因此對(duì)于使用氨芐作為抗性標(biāo)記的克隆，每隔一段時(shí)間需要檢查細(xì)菌質(zhì)粒丟失情況。比較直觀的辦法就是通過(guò)SDS-PAGE，如果發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平降低了，很大可能是因?yàn)橘|(zhì)粒丟失了，此時(shí)需要重新轉(zhuǎn)化重組載體。
3. 不要使用配制時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或超過(guò)效期的氨芐溶液。氨芐存儲(chǔ)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或者保存不當(dāng)，很有可能發(fā)生降解。
4. 液體培養(yǎng)建議：在液體培養(yǎng)中，不要讓細(xì)菌長(zhǎng)到過(guò)飽和，在LB培養(yǎng)基中，OD600絕對(duì)不能超過(guò)3。如果是擴(kuò)大培養(yǎng)，可以先把初始培養(yǎng)液內(nèi)細(xì)菌沉淀，然后利用新鮮的培養(yǎng)液重懸，再進(jìn)行下一步的培養(yǎng)，這樣可以大大減少β-內(nèi)酰胺酶在液體中的含量。