10×RealBlot 快速轉(zhuǎn)膜液
10×RealBlot Rapid Transfer
buffer
● 產(chǎn)品組成：
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貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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保存條件
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RT5020
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10×RealBlo快速轉(zhuǎn)膜液
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500 ml
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4℃
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說(shuō)明書
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一份
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
快速轉(zhuǎn)膜液使用獨(dú)特配方，能高效快速地將蛋白轉(zhuǎn)移到印跡膜（PVDF或硝纖膜）上。使用濕轉(zhuǎn)法（Tank blot）或半干轉(zhuǎn)法（Semi-dry blot）方法，能在10-40分鐘內(nèi)完成轉(zhuǎn)膜過(guò)程。
快速和環(huán)保：快速轉(zhuǎn)膜液不使用甲醇，減輕了對(duì)實(shí)驗(yàn)者和環(huán)境的傷害。
兼容性好：快速轉(zhuǎn)膜液能兼容Laemmli膠，預(yù)制膠，Bis-Tris膠等多種凝膠。
轉(zhuǎn)移效率高：快速轉(zhuǎn)膜液對(duì)分子量跨度較大的蛋白也有很好的轉(zhuǎn)移效率，有效解決了大小蛋白不能在同一張膜上同時(shí)轉(zhuǎn)移的問(wèn)題。
● 貯存及運(yùn)輸：
4-8℃貯存，有效期一年；常溫運(yùn)輸。
● 使用說(shuō)明：
轉(zhuǎn)膜前的準(zhǔn)備：
6-10張裁好的普通濾紙或Whatman3MM濾紙；裁好的轉(zhuǎn)印膜；足夠的1×快速轉(zhuǎn)移buffer；無(wú)水甲醇（處理PVDF膜用）
一 濕轉(zhuǎn)法（Tank blot）：
1 按照下表配制1×快速轉(zhuǎn)膜液
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1×快速轉(zhuǎn)膜液配制量 1000ml
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10×快速轉(zhuǎn)膜液
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100 ml
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無(wú)水乙醇
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200 ml
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超純水
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700 ml
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2 將濾紙和海綿浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘。
3 PVDF膜使用前要用無(wú)水甲醇潤(rùn)濕30秒，隨后浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘；NC膜無(wú)需處理，直接浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中。
4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS；隨后將凝膠浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中。
注意：水中漂洗時(shí)間一定不能超過(guò)2分鐘，否則分子量較大的蛋白不能完全轉(zhuǎn)移。
5 按照以下順序做好轉(zhuǎn)印三明治結(jié)構(gòu)：
1 負(fù)極（陰極）
2 一塊海綿
3 濾紙（3張）
4 凝膠
5 轉(zhuǎn)印膜
6濾紙（3張）
7 一塊海綿（根據(jù)三明治的厚度選擇是否使用）
8 正極（陽(yáng)極）
注意： ① 要徹底清除三明治結(jié)構(gòu)中的氣泡，適當(dāng)補(bǔ)加1×快速轉(zhuǎn)膜液保持三明治結(jié)構(gòu)濕潤(rùn)。
② 三明治結(jié)構(gòu)的制作不能太緊，也不能太松。太緊和太松都會(huì)影響轉(zhuǎn)印效果。如果太緊的話，可以去除陽(yáng)極一側(cè)的海綿。
6 將三明治結(jié)構(gòu)放于轉(zhuǎn)移槽中，轉(zhuǎn)印槽中灌滿1×快速轉(zhuǎn)膜液。
7 濕轉(zhuǎn)推薦使用恒流轉(zhuǎn)移：
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電流
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轉(zhuǎn)移時(shí)間
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電壓變化
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300 mA
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30 to 35 min
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50-55 V
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350 mA
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25 to 30 min
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55-58 V
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375 mA
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20 to 25 min
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58-62 V
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400 mA
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15 to 20 min
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58-65 V
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二 半干轉(zhuǎn)（Semi-dry blot）：
1 按照下表配制1×快速轉(zhuǎn)膜液：
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1×快速轉(zhuǎn)膜液配制量 500ml
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10×快速轉(zhuǎn)膜液
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50 ml
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無(wú)水乙醇
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100 ml
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超純水
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350 ml
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2 將濾紙浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕。
3 PVDF膜使用前要用無(wú)水甲醇潤(rùn)濕30秒，浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘。NC膜無(wú)需處理，直接浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中。
4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS；隨后將凝膠浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中。
注意：水中漂洗時(shí)間不能超過(guò)2分鐘，否則分子量較大的蛋白可能不能完全轉(zhuǎn)移。
5 按照以下順序做好轉(zhuǎn)印三明治結(jié)構(gòu)：
1 負(fù)極（陰極）
2 下層濾紙（5張）
3 凝膠
4 轉(zhuǎn)印膜
5 上層濾紙（5張）
6 正極（陽(yáng)極）
半干轉(zhuǎn)時(shí)，濾紙、膠、膜之間的大小，一般是下層濾紙>=膜>=膠>=上層濾紙。上下兩層的濾紙一定不能接觸；濾紙、膠、膜之間千萬(wàn)不能有氣泡，接觸的濾紙和氣泡會(huì)造成短路。
6 半干轉(zhuǎn)推薦使用恒流轉(zhuǎn)移：
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恒電流
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轉(zhuǎn)移時(shí)間
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電壓變化
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400 mA
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25-30min
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9-13 V
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注：不同廠家半干轉(zhuǎn)儀器設(shè)置可能有所不同，請(qǐng)根據(jù)廠家說(shuō)明書適當(dāng)調(diào)整。
三 問(wèn)題解決：
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問(wèn)題
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可能原因
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解決方法
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轉(zhuǎn)膜不充分
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濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移槽鉑金絲有鹽沉積
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徹底用超純水清洗轉(zhuǎn)移槽
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轉(zhuǎn)移膜，濾紙，凝膠沒(méi)有在1×轉(zhuǎn)移緩沖液中徹底平衡
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轉(zhuǎn)移膜，濾紙，凝膠要在1×快速轉(zhuǎn)膜液中平衡5分鐘，震蕩平衡更好
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PVDF膜沒(méi)有用甲醇預(yù)處理
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PVDF膜要用甲醇徹底潤(rùn)濕，然后在1×快速轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡5分鐘
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轉(zhuǎn)膜時(shí)間不充分
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適當(dāng)延長(zhǎng)轉(zhuǎn)膜時(shí)間
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不連續(xù)的轉(zhuǎn)膜
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凝膠和膜之間有氣泡
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轉(zhuǎn)膜三明治做好后，用滾軸把凝膠和膜之間的氣泡趕走
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PVDF膜沒(méi)有用甲醇預(yù)處理
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PVDF膜要用甲醇潤(rùn)濕，然后在1×快速轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡5分鐘
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轉(zhuǎn)膜設(shè)備不工作
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電泳電源不配套
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電泳電源要符合以下參數(shù)：300W，5-300V，0.01-3A
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實(shí)驗(yàn)示例：
