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離心式去垢劑去除柱

離心式去垢劑去除柱

產(chǎn)品編號:DD0550

產(chǎn)品規(guī)格:10套/包

數(shù)量
價格 ¥0

離心式去垢劑去除柱

貨號

名稱

規(guī)格

DD0550

離心式去垢劑去除柱(處理25-100 μl蛋白樣品)

10

 

● 產(chǎn)品組成:

貨號

名稱

規(guī)格

DD0550-01

0.5 ml去垢劑去除柱(含套管)

10

DD0550-02

2 ml尖底離心管

10

 

● 產(chǎn)品介紹:

離心式去垢劑去除柱能夠通過離心快速去除蛋白溶液或質(zhì)譜分析中肽段溶液中的常用去垢劑,包括離子型去垢劑,非離子去垢劑和兩性離子去垢劑。在蛋白實(shí)驗(yàn)中,去垢劑在促進(jìn)蛋白溶解,增加蛋白穩(wěn)定性以及阻止蛋白聚集方面都有重要作用。然而,蛋白溶液中的去垢劑會對下游實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響,如ELISA,等電聚焦以及質(zhì)譜分析等。在質(zhì)譜分析中,去垢劑會與肽段形成加合離子抑制肽段離子化,導(dǎo)致m/z值的遷移。因此,質(zhì)譜分析中去除肽段溶液中多余的去垢劑是影響分析結(jié)果的重要因素。該去除柱可以高效(>95%)去除樣品中各種常用的去垢劑(濃度范圍1-5%)。

去垢劑去除柱參數(shù)如下:

柱體積

填料溶脹后體積

處理樣品體積

推薦起始樣品濃度

去除效率

0.5 ml

~0.6 ml

25-100 μl

0.5 μg/μl

~95%

● 貯存、運(yùn)輸和效期:

4℃貯存(不能冷凍);常溫運(yùn)輸;有效期1年。

● 操作步驟

一、 去垢劑去除柱預(yù)處理:

1.1 取出柱子,放入套管中。  

1.2 旋開管蓋,不要擰掉柱子底部堵頭,加入0.4 ml 1×PBS,蓋緊管蓋,常溫靜置2 min,活化填料。

1.3 擰掉柱子底部堵頭,將柱子放入套管中,1000 g 離心1 min,棄流穿液。

注:離心力不要高于1000 g,過高的離心力會損傷填料,降低去垢劑去除效率。

1.4在柱子管蓋上標(biāo)記填料在柱子內(nèi)的傾斜方向,隨后離心步驟均按同一傾斜方向在離心機(jī)內(nèi)放置柱子。

1.5柱子中加入0.4 ml 1×PBS,1000 g 離心1min,棄流穿液。至此,柱子活化結(jié)束,備用。

二、樣品去垢劑去除:

2.1 將柱子轉(zhuǎn)移到2 ml尖底離心管中,加入25-100 μl待處理樣品(樣品濃度高于0.5 μg/μl),常溫靜置2 min。

2.2 1000g 離心2 min,收集離心管內(nèi)樣品。

注意事項(xiàng):

1. 去垢劑去除效果:可以高效的(>95%)去除樣品中各種常用的去垢劑(濃度范圍1-5%)。

去垢劑去除效率和蛋白回收效率

去垢劑

濃度

去除效率

BSA回收效率

(上樣量100 μg

SDS

2.5%

99%

95%

脫氧膽酸鈉

5%

99%

99%

CHAPS

3%

99%

90%

Triton X-100

2%

99%

87%

NP-40

1%

95%

91%

Brij-35

1%

99%

97%

Tween-20

0.25%

99%

87%

Octyl glucoside

5%

99%

90%

2. 樣品處理體積要在柱子處理范圍內(nèi),該去除柱最多處理體積是100 μl樣品,過多會導(dǎo)致收集 

管中液體浸沒到去除柱。

3. 當(dāng)樣品濃度過低時(<0.5 μg/μl),需先將樣品濃縮到所需體積或所需濃度。

常見問題:

常見問題

可能原因

解決方法

蛋白回收率偏低

蛋白濃度過低(<0.5 μg/μl)

對蛋白液進(jìn)行適當(dāng)濃縮

樣品不能流穿

未扭掉柱子底部的堵頭

按照步驟1.3扭掉堵頭

實(shí)驗(yàn)示例:


 
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